Principe

Pour la mise en évidence des granulocytes. Les lysozomes des granulocytes contiennent une estérase spécifique qui utilise le Naphtol AS-D Chloroacétate comme substrat. La libération du Naphtol entraîne la formation avec le diazonium Fast Red Violet LB des dépôts rouges.

Réactifs

Sigma: Kit num. 91C
Naphtol AS-D Chloroacetate Esterase

Préparation du réactif de travail

1. Mélanger

   0,1 ml de la solution de nitrite
   0, 1 ml de la solution de Fast Red Violet LB

2. Attendre 2 minutes (préparation du diazo)
3. Ajouter 4 ml d' H2O à 37°C. Mélanger
4. Ajouter 0,5 ml de Tampon Trizmal pH 6,3 . Mélanger
5. Ajouter 0,1 ml de Naphtol AS-D Chloroacétate. Mélanger
6. La solution devient rouge. S'il y a formation d'un précipité centrifuger ou filtrer le réactif.

Technique de coloration

1. Placer dans un tube 100 à 200 ul du sédiment concentré "culot"
2. Ajouter à ce tube 2 ml du réactif
3. Incuber à 37°C pour 15 minutes
4. Les noyaux peuvent être colorés en ajoutant 2 gouttes de Bleu de méthylène (facultatif)
5. Centrifuger et lire le culot entre lame et lamelle

Résultats

Les leucocytes polynucléaires prennent une coloration rouge cerise tandis que le reste est incolore ou prend la teinte rosée du réactif. La coloration rouge orangé est due au réactif non spécifiquement adsorbé. Les mastocytes ainsi que quelques macrophages donnent une réaction positive.

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