Réactifs

• Filtres (Gelman GN6 13 mm) ou (Millipore RAW 013 )
• Porte filtre sweeny 13 mm
• Solution de Hank's ou une autre solution de même utilité
• Hématoxiline sans acide Ferland
• Orange G ( Ortho )
• Ea 65 ou Ea 50 ( Ortho )
• Alcool 95%, 1-propanol, toluène

Technique avec filtre Acétate

1. Centrifuger 10 ml urine
2. Décanter le maximum d'urine
3. Resuspendre le culot jusqu'à un ml avec la solution de Hank. Vérifier la cellularité
4. Ramener le volume à sa valeur initiale avec la solution de Hank. Mélanger
5. Placer le filtre dans de l'éthanol 95% pour 10-15 sec. et monter dans le porte filtre.
6. Rincer le filtre en injectant avec une seringue 2 ml de solution de Hank
7. Filtrer par injection, 1ml ou moins de la suspension dépendant de la cellularité.
8. Rincer en filtrant avec une seringue 2 à 5 ml de solution de Hank
9. Démonter et récupérer le filtre
10. Parlodion un trempage ( in and out ) (Facultatif)
11. Fixer immédiatement avec EtOH 95% Ne jamais laisser sécher le filtre.
12. Colorer le filtre et monter

Coloration PAP pour filtre Acétate

1. EtOH 95%............................10 min.
2. H2O ....................................10 min.
3. Hématoxiline** (Ferland)..2 min.
4. H2O courante ....................10 min.
5. HCl 0.05% ..........................7 trempages (décoloré au besoin)
6. H2O courante 37°C ..........6 min.
7. EtOH 95% ...........................2 min.
8. Orange G** ........................2 min.
9. EtOH 95% ..........................2 min.
10. EtOH 95% ..........................2 min.
11. EtOH 95% .........................2 min.
12. EA 65**...............................2 min.
13. EtOH 95%............................2 min.
14. EtOH 95%............................2 min.
15. EtOH 95%............................2 min.
16. 1-propanol 100%...............2 min.
17. 1-propanol 100%...............2 min.
18. 1-propanol /Toluène ( 1:1)..2 min.
19. Toluène...............................6 min.

Montage

1. Lame
2. 1 goutte d'Eukitt
3. Le filtre
4. 2 à 4 gouttes sur le filtre
5. Placer la lamelle

Mettre sur une plaque chauffante à 50C et laisser se disperser

Résultats

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